Pruebas Bioquímicas

La identificación de M. tuberculosis puede realizarse mediante pruebas bioquímicas sencillas. Las cepas de M. tuberculosis son niacinas positivas, reducen nitratos a nitritos y poseen una catalasa termolábil. La lentitud de las técnicas de identificación bioquímica estándar ha estimulado el desarrollo de técnicas de identificación rápidas como las sondas genéticas y la cromatografía.

Cromatografía

    Las micobacterias se caracterizan por poseer una pared celular extraordinariamente rica en lípidos. Algunos de estos lípidos, denominados ácidos micólicos son característicos de este género, encontrándose además diferencias cuantitativas y cualitativas en la composición de ácidos micólicos de las diferentes especies. 

    Los ácidos micólicos pueden separarse con relativa facilidad en su forma de esteres metílicos por cromatografía en capa fina (CCF) en gel de sílice, cromatografía de gases o cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). Estas técnicas se utilizan en laboratorios de nivel III.

Una sonda es un reactivo biológico constituido por un fragmento de ADN que posee una secuencia de bases complementaria a la del genoma de un microorganismo. Las sondas están marcadas con diversos indicadores como isótopos radiactivos o sustratos cromógenos . Cuando se libera el ácido nucleico de un microorganismo y después se desnaturaliza el ADN liberado (se separan las dos hebras que forman la molécula de ADN por procedimientos físicos [ Tª 90 a 140 ºC ] ), la sonda es capaz de fijarse (hibridarse) con su fragmento homólogo, si existe. La hibridación de la sonda a su fragmento homólogo se detecta fácilmente gracias al marcador que se ha incorporado. Actualmente disponemos de sondas (Gen-Probe®, Syngene®) para identificación de M. tuberculosis, M. avium, M. intracellulare, M. kansasii y M. gordonae. Entre las principales ventajas de las sondas genéticas hay que destacar la sencillez de su manipulación, que permite su adaptación a cualquier laboratorio. El principal inconveniente es su coste. Es una tecnología muy utilizada en la actualidad en laboratorios nivel II.

La luz es detectada mediante la utilización de un luminómetro